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更新时间:2020-06-07 05:03  

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  【悬赏金币】回答本帖问题,作者bio_weiyaya将赠送您 20 个金币

  目前所在做的C18(4.6*250mm)HPLC分析中关于柱平衡有一些问题

  基本情况:柱子保存在100%甲醇中,分析所用流动相为甲醇:水。每次柱平衡都是梯度平衡,即从100%甲醇过渡到分析所用比例,在此比例下直至基线ml/min流速下,大概多长时间变换一下甲醇和水的比例,变换的幅度多大合适。

  2:通常所说的15-20倍柱体积平衡柱子,是从基线平稳开始算起还是其他?

  3:做过几次实验,100%甲醇过渡到分析用比例大概有1h,基线min进样,样品保留时间5.9min,正常是7.6min。后又在极限平稳之后运行1h左右,保留时间变化至6.4min,若改成两小时仍然为6.4min。

  基于以上试验情况,我分析是平衡方法不对,请大家给点意见,如果需要更多信息,我再给添上,还有金币。

  1:梯度平衡无所谓正确与否,只是楼主这样做有点麻烦。楼主测样的方法是用梯度还是等度?因为楼主没有用盐,所以直接平衡。比如你是甲醇:水=60:40,你就直接用这个比例的流动相来平衡;如果是梯度,亚洲城ca88手机,使用初试比例平 ...

  1:我看到反向色谱有机相和水相调节比例不能变化太大,所以就慢慢的改比例。条件是等度(99%水,前人做的条件),目前也是按照师兄教我的步骤做,之前问题不大,最近经常出现保留时间缩短的情况。

  2:前几天做了一次,在基线平稳之后,马上就跑样,标样保留时间是5.9min,又做了一次实验,基线h左右跑样,标样保留时间为6.4min,样品分离度不好。后来考差了2h,保留时间仍然为6.4min.

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